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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒(méi)有全面的理解。 由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類型
2、物種來(lái)源
3、動(dòng)物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質(zhì)
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時(shí)間
通常前四個(gè)原因沒(méi)辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
通過(guò)查閱文獻(xiàn)來(lái)選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來(lái)源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性，以及過(guò)去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟， 以便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案，同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻(xiàn)，以組織類型和物種分類，詳見(jiàn)鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結(jié)腸組織 | 內(nèi)皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結(jié) | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經(jīng)組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動(dòng)物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細(xì)胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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注：使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。
扁桃體組織消化手冊(cè)
| 物種 | 詳細(xì)來(lái)源 | 細(xì)胞名稱 | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻(xiàn) |
| 人類 | 人類, 女性, 25-45 歲 | Tonsillar mononuclear cells | Collagenase Type 1: 210 u/ml | RPMI | Grammer Amrie C, Slota Rebecca, Fischer Randy, Gur Hanan, Girschick Hermann, Yarboro Cheryl, Illei Gabor G, Lipsky PeterE: Abnormal germinal center reactions in systemic lupus erythematosus demonstrated by blockade of CD154-CD40 interactions, J Clin Invest 112, 1506-20, 2003 |
| Deoxyribonuclease I: 90 u/ml | |||||
| 人類 | 人類 | Tonsillar mononuclear cells | Collagenase Type 1: 210 u/ml | RPMI | Grammer AC, McFarland RD, Heaney J, Darnell BF, Lipsky PE: Expression, regulation, and function of B cell-expressed CD154 in germinal centers, J Immunol 163, 4150-9, 1999 |
| Deoxyribonuclease I: 90 u/ml |
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